产品名称 | 单位 | 货号 |
Livning Fast qPCR RT kit with gDNA remover | 10T | FM166PS |
Livning Fast qPCR RT kit with gDNA remover | 100T | FM166PM |
【储存条件】 |
-20˚C。使用后请及时放入-20˚C 保存以保证酶的活性。
【产品简介】
Livning Fastq PCR RT kit with gDNA remover 是在 LMF166 基础上将去除基因组 DNA（gDNA）酶和 buffer 进行了一管化处理，专为两步法 RT-PCR 第一步实验设计的超高灵敏度 RT-PCR 反应系统，可以从极低量的总 RNA 或 poly(A) mRNA 合成第一链cDNA，并能够通读 GC 含量高、二级结构复杂的 RNA 模板。通常通过柱纯化的RNA 经常混入微量的gDNA，当检测目的基因中存在假基因或者无法横跨内含子设计引物时，混入的 gDNA 会被当成模板扩增，影响数据的准确性。本试剂盒增加了具有强力降解 DNA 的 gDNA 清除剂，通过该组分将混入RNA 的gDNA 降解，无需纯化即可对 RNA 进行反转录。另外，本产品将引物配比、反转录酶和RNase 抑制剂优化成 mix 形式，精简了试剂盒组成，非常简便操作，而且对后续 Realtime PCR 反应体系影响也降到最低。
【产品特点】
1) 去除gDNA：只需 2 分钟，就可以实现去除基因组DNA 污染。
2） 方便快捷：mix 配制，组分更少，操作更快；逆转录只需 15min 就可以完成。
3） 超强对后续 qPCR 反应适用性：通过组分和Buffer 优化，使带入到后续 qPCR 反应的逆转录反应液的影响降到最低。
4） 高灵敏度：对极少量的 RNA 模板也可以进行良好的反转录反应。
【产品组分】 | ||
10x gDNA Fast Remover Mix | FM166PS 10 μl | FM166PM 100 μl |
5x Livning RT FastMix* | 40 μl | 400 μl |
DEPC-ddH2O (无色) | 0.5 ml | 1.5 ml |
* 5x Livning RT FastMix：由 Livning Fast M-MuLV Reverse Transcriptase，RNase inhibitors, Oligo dT primer, Random Primer, Buffer, dNTPs 等构成的 Mix 形式。打开盖子前，请先离心，使液体落在离心管底部后再使用。另外，本试剂粘度很高，请小心使用移液器。
【活性定义】
以 poly(rA)为模板，oligo(dT)为引物，在 42˚C 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。
【注意事项】
1. 实验过程中请全程注意避免 RNase 污染。
2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3. RNA 模板的完整性对 cDNA 合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的 RNA 提取/纯化方法。建议使用 Livning Total RNA Extraction Reagent (TRIgent) (货号 LV-MF034-01 或者 LV-MF736-01) 制备高质量的 RNA 模板，并设置反转录反应阳性对照。
4. Livning M-MuLV RTase 以 RNA 为模板获得全长的第一链 cDNA，其起始位点由所用引物所决定：
1) 随机引物 (Random Primer) 在 RNA 模板上没有特异性结合位点，所有 RNA 都可以做为第一链 cDNA 合成的模板；
2) Oligo dT Primer 只能以 poly(A) mRNA 作为 cDNA 合成的模板；
3) 采用序列特异性引物 (Gene Specific Primer) 以其结合位点为起始位点。
5. Livning M-MuLV RTase 合成的第一链 cDNA 产物可直接加入 PCR 反应混合物中进行扩增。PCR 扩增使用的耐热 DNA 聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、GC 含量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。
6. 第一链 cDNA 合成产物经过处理后可作为第二链合成的模板，合成含各种标记的 cDNA，作为杂交实验的探针。
RNA 可置于-70˚C 以下长期保存，cDNA 合成产物可置于-20˚C 保存。