Livning® qPCR RT kit 一管化的反转录试剂盒

【储存条件】

长期保存，请置于-20˚C，有效期 12 个月。使用后请及时放入-20˚C 保存以保证酶的活性。

【产品简介】

本产品是专为两步法 RT-PCR 第一步实验设计的超高灵敏度 RT-PCR 反应系统，可以从极低量的总 RNA 或 poly(A) mRNA 合成第一链 cDNA，并能够通读 GC 含量高、二级结构复杂的 RNA 模板。该试剂盒使用Livning特制的 Livning M-MuLV Reverse Transcriptase (RTase)，该 RTase 通过多点定点突变去除了 RNase H 的活性 (RNase H－)，并增加了 RTase 酶与模板－引物之间的亲和力，具有更好的热稳定性，因此其聚合酶的活性和持续合成能力均高于野生型的 M-MuLV RTase，合成的 cDNA 产量更高，长度可达 15 kb。另外，本产品将引物配比、反转录酶和 RNase 抑制剂优化成mix 形式，精简了试剂盒组成，非常简便操作，而且对后续 Realtime PCR 反应体系影响也降到最低。

【产品特点】

1) 方便快捷：mix 配制，组分更少，操作更快；逆转录只需 15min 就可以完成。

◆ 超强对后续 qPCR 反应适用性：通过组分和Buffer 优化，使带入到后续 qPCR 反应的逆转录反应液的影响降到最低。

◆ 高灵敏度：对极少量的 RNA 模板也可以进行良好的反转录反应。

* 5x Livning® RT Super Mix：由 Livning® M-MuLV Reverse Transcriptase，RNase inhibitors, Oligo dT primer, Random Primer, Buffer, dNTPs

等构成的 Mix 形式。打开盖子前，请先离心，使液体落在离心管底部后再使用。另外，本试剂粘度很高，请小心使用移液器。

**5x Livning®  RT Super Mix Control：该组分是 5x Livning®  RT Super Mix 去除了 Livning®  M-MuLV Reverse Transcriptase 的 mix，可以用于反转录的对照。打开盖子前，请先离心，使液体落在离心管底部后再使用。另外，本试剂粘度很高，请小心使用移液器。

【活性定义】

以 poly(rA)为模板，oligo(dT)为引物，在 42˚C 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。

【注意事项】

1. 实验过程中请全程注意避免 RNase 污染。

2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。

3. RNA 模板的完整性对 cDNA 合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的 RNA 提取/纯化方法。建议使用 Livning®  Total RNA Extraction Reagent (TRIgent) (货号 lv-MF034) 制备高质量的 RNA 模板，并设置反转录反应阳性对照。

4. Livning®  M-MuLV RTase 以 RNA 为模板获得全长的第一链 cDNA，其起始位点由所用引物所决定：

• 随机引物 (Random Primer) 在 RNA 模板上没有特异性结合位点，所有 RNA 都可以做为第一链 cDNA 合成的模板；

• Oligo dT Primer 只能以 poly(A) mRNA 作为 cDNA 合成的模板；

• 采用序列特异性引物 (Gene Specific Primer) 以其结合位点为起始位点。

5. Livning®  M-MuLV RTase 合成的第一链 cDNA 产物可直接加入 PCR 反应混合物中进行扩增。PCR 扩增使用的耐热 DNA 聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、GC 含量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。

6. 第一链 cDNA 合成产物经过处理后可作为第二链合成的模板，合成含各种标记的 cDNA，作为杂交实验的探针。

7. RNA 可置于-70˚C 以下长期保存，cDNA 合成产物可置于-20˚C 保存。